HPL人胎盤泌乳素ELISA試劑盒

美國DRG*，貨號：EIA1283

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DRG公司的HPL（人胎盤泌乳素）ELISA試劑盒可用于人血清中HPL的定量檢測。此試劑盒僅供體外診斷用。

HPL的是生理學功能到目前為止還未確定，但它很大程度上與人生長激素一樣是孕期胎兒胎盤和生理變化的調節者，這表明母體血清HPL的水平可以放映胎盤的功能。

在（胎兒）宮內死亡、嬰兒分娩疼痛和生產時胎兒窒息的病例中，其人胎盤泌乳素（HPL）水平會降低。如果HPL的低水平重復出現，那么這種相關性就特別明顯，它表明子宮長期處于這種狀態就會使胎兒受到損害。如果孕期正常，母體HPL水平降低（的情況）一般不會出現。在單胎妊娠中，如果HPL水平升高則意味著*的妊娠結果。然而高水平的HPL也有可能意味著嬰兒潛在某些特定疾病，如糖尿病嬰兒先天肥胖性巨體、新生兒溶血癥和胎兒水腫病的重要病理學原因。

   DRG公司的HPL酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶聯免疫吸附實驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔包被有能結合HPL分子上*抗原位點的單克隆抗體。一份含有內源性HPL的病人樣本在包被孔中與酶聯物進行孵育，該酶聯物是一種聯結有辣根過氧化物酶的抗HPL抗血清。孵育后，用洗滌液洗去未結合的酶聯物。辣根過氧化物酶的結合總量與樣本中HPL的濃度成正相關。加入底物溶液后，顯出的顏色強度與病人樣品中HPL的濃度成正比。

1）       微孔反應板，可拆，12×8（96孔），包被有抗HPL的單克隆抗體。

2）       標準品（標準品1-4），4支，0.5ml，待用。濃度：1.25；5.0；10.0；20mg/L，轉換系數：1mg/L=1mIU/L。內含0.3%的Proclin防腐劑。

3）       零標準品（也用做樣品稀釋液），1支，90ml，待用，0mg/L。內含0.3%的Proclin防腐劑。

4）       酶聯物，1支，11ml，聯結有辣根過氧化物酶的抗HPL 抗體。內含0.3%的Proclin防腐劑。

5）       底物溶液，1支，11ml，待用，TMB（四甲基聯苯胺）

6）       終止液，1支，6ml ，內含0.5M的H2SO4。請不要接觸終止液，以免刺激皮膚和著燒。         

   未開啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內可以保持活性。不要使用過期試劑。酶聯物、底物溶液、標準品和零標準品必須在2—8℃下貯存。

   微孔反應板必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開，必須將它小心地嚴封起來。拆開包裝后，包被的微孔反應板的免疫活性可在約6周內保持穩定，但必須密封在裝有干燥劑的袋子里。

1）       酶標儀 （450±10nm）（如DRG 公司的酶標儀）

2）       配有一次性使用的10μl、50μl、100μl和1000μl吸嘴的取樣槍

3）       吸水紙。

4）       蒸餾水

5）       用于樣品稀釋的試管（12×75mm）。

血清將會在此實驗中用到。不要使用易溶血、黃疸血或脂血樣品。注意：含疊氮鈉的樣品不可用于此實驗。

1）       樣品的采集：血清，靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下用離心機分離血清。未*凝血前請勿離心，接受了抗凝劑治療的病人樣品可能需要更長的凝血時間。

2）       樣品的儲存：必須蓋住樣本并在實驗之前于２-８℃下可貯存至５天。樣品需要更長的貯存時間，必須在實驗之前于-20℃下一次性凍存。融化的樣本在檢測之前必須要上下倒置幾次。

3）       樣品的稀釋：實驗開始前，用零標準品按1：100的比例稀釋樣品。首先在每一樣品試管中加入1ml零標準品，再向相應的試管中加入10μL樣品，把所有的試管在旋渦混合器上混合10秒（避免氣泡）

4）       在實驗中，樣品中HPL濃度高于zui高標準品的必須用零標準品進行進一步的稀釋。在計算樣品濃度時就應當把此稀釋因子考慮進去。

1）       所有試劑和樣本在使用之前必須平衡至室溫。所有試劑必須搖勻但不能起泡沫。

2）       一旦檢測開始，所有的操作步驟必須進行到底不能中斷。

3）       為了避免交叉放映，每一標準品、質控品和樣品的取樣都必須使用新的取樣吸頭。

4）       吸光度值是由孵育的時間和溫度所決定的。在實驗開始之前，建議準備好所有的藥劑旋開蓋子。

將所需檢測的微孔板條固定在板架上等。這些準備工作將確保每次的加液步驟所需時間相同，沒有中斷。

5）       按一般的規律，酶免反應的強度與時間和溫度成線性比例。

1）       手工加樣：建議每次實驗做不超過32個檢測孔。或者，建議在三分鐘內加完所有的標準品、樣品和質控品。

2）       自動加樣：每次實驗可做整板96個檢測孔。或者，建議在三分鐘內加完所有的標準品、樣品和質控品。

3）       所有的標準品、樣品和質控品都必須同時做雙份，以保證所有的檢測條件都一樣。每次檢測都必須有一條標準曲線。

1）       將所需數量的板條固定到板架上。

2）       將標準品、質控品和已稀釋好的樣品分別用新的取樣吸頭取10μL加入到相應的微孔中。

3）       在每一微孔中加入100μL酶聯物。

4）       充分混勻10秒，在這個步驟*混勻很重要。

5）       室溫孵育30分種。

6）       快速棄取孔內反應物，每孔用400μL蒸餾水洗板5次，在吸水紙上拍干。注意：洗板步驟是否正確操作會明顯影響實驗的靈敏度和度。

7）       在每一微孔中加入100μl底物。

8）       室溫孵育10分種。

9）       加50μl終止液到每個檢測孔中終止酶反應。

10）   加終止液后10分鐘之內，用酶標儀在450±10nm處測定OD 值。

1）       計算每個標準品、質控品和病人樣本的平均吸光度值。

2）       用吸光度值作為縱坐標（y），濃度值作為橫坐標（x），以每個標準品的吸光度值對其相應的濃度值進行標繪，作一條標準曲線。

3）       用每一樣品的平均吸光度值在標準曲線上確定其相應的濃度。

4）       自動計算方法：IFU上的結果是用四參數曲線已自動計算得到的。其它的歸納方法可能會得出稍微不同的結果。

5）       樣品的濃度可直接從標準曲線上讀取。樣品中HPL濃度高于zui高標準品的必須用進行進一步的稀釋。在計算樣品濃度時就應當把此稀釋因子考慮進去。

強烈建議每個實驗室都建立自己實驗室的正常和不正常值。在一次研究中，我們用DRG公司的hPL ELISA進行檢測，得到如下結果：

 

 

１．              特異性

     用來檢測的抗原                                    與HPL等價

人絨毛膜促性腺激素          2000IU/ L              檢測不出

催乳激素                                     200μg/L                          檢測不出

     甲胎蛋白                   300KIU/L                檢測不出

 人生長激素                 100μg/L                檢測不出

２．              靈敏度

用本實驗方法測得的HPLzui小濃度值為0.043 mg/L。

３．              度

a.            批內差實驗度

該度是由在一實驗當中對3個不同質控品的重復測定來決定的。批內差異羅列如下：

b.            批間差實驗度

該度是由在幾次實驗當中對3個不同質控品的重復測定來決定的。批間差異羅列如下：

４．              重復性和線性

a.            重復性

不同的已知HPL水平的病人血清樣本混合起來并做雙份實驗。平均重復率為101.17%。

期待濃度值（mg/L）        測得的濃度值（mg/L）           重復率（%）

 

b.            線性

    在線性研究中，用零標準品對兩個病人樣本進行一系列的稀釋。平均重復率為99.7%。

病人樣本號     稀釋度   期待濃度值（mg/L）  測得的濃度值（mg/L）        重復率（%）

５．              Hook’s效應

本實驗中，HPL濃度值達到700mg/L仍未產生Hook’s效應。

l        質量控制

良好的實驗操作要求每次用校準曲線來做質控品。測定一批具有統計學意義數量的質控品，來建立平均值和正常人的濃度值范圍以確保合適的實驗操作。不應使用含有疊氮化物的質控品。

l        產品限制

1）       做實驗時要對包裝內說明書有充分的理解并具有良好的實驗操作，這樣會獲得可靠得和可重復   的結果。

2）       使用本試劑盒得到的結果應該僅作為其它診斷程序的一個幫助和為內科醫生提供有用的信息。

3）       沖洗步驟很關鍵。沖洗不充分會導致度低并使光度值讀數偏高。

 

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

 

 

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